房屋仲介”有巢氏”，PCR也有巢式! —— Nested Polymerase Chain Reaction)

整理，撰文:林沁融

對PCR來說，最令人困擾的莫過於非專一性的片段產生。所以為了預防這種事情發生，我們想了許多的方法來解決。上禮拜提到先將溫度調高，在逐漸調低溫度；或是額外加入添加劑，都是不錯的方法。那這次要介紹的是另一種方法，同樣可以提高專一性的巢式聚合酶鏈鎖反應 （Nested PCR）。

巢式聚合酶鏈鎖反應 (nested Polymerase Chain Reaction)，Nested PCR。它的原理是利用兩套PCR primer進行兩次PCR反應。在第一次時，第一套primer產生的較長片段的產物，讓第二套primer來進行第二次的PCR反應。由於巢式PCR反應有兩次PCR，因此降低了產生不專一片段的可能性，因為與兩套 primer 都互補的template很少，如果第二次PCR時發現配對不了，那就表示第一次的PCR完就有問題。透過縮小PCR範圍的方式，比起一般 PCR，可以得到更專一的序列。如果到這邊還是不太懂，那下面這張圖可以更清楚讓你了解。

圖片來源: https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/9/95/Nested_PCR.png

首先藍色的DNA template上面有我們要的序列 (Target Sequence)，那我們會加入兩組primer，第一組是綠色的，也就是第一次PCR要用到的，第二組是紅色的，是第二次PCR才會用到的。

第一次PCR時，綠色primer會先黏上去，那當PCR完成時，會有兩個產物。一個是圖左邊的非專一產物也就是我們不要的產物，右邊的則是我們要的產物，不過他會比我們要的Target Sequence還要再長一點，所以我們要再進行第二次PCR。

第二次PCR時，換紅色primer黏上，使 Target Sequence的產物再進行一次PCR，所得到的產物就會是Target Sequence啦。

看完了Nested PCR的介紹，想必大家又多了解了一樣如何提高專一性的PCR技術了！或許這個方法看似麻煩，但他的專一性可是相當的高。希望這篇能夠對大家的實驗有幫助啦!

資料來源:

1.          維基百科:

https://en.wikipedia.org/wiki/Nested_polymerase_chain_reaction

2.          DAVIDSON-Biology Department:

http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/NestedPCR.html

3.          Time To Instigate Nested PCR-by Olwen Reina 9^th July ,2016

http://bitesizebio.com/24592/time-to-instigate-nested-pcr/